जैविक नमूनों में एनएमएन की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक वैज्ञानिक विधि
1. प्रस्तावना
का पूरकता निकोटिनामाइड मोनोन्यूक्लियोटाइड (एनएमएन) निकोटिनमाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड (एनएडी +) के स्तर को बढ़ाने के लिए एक आशाजनक एंटी-एजिंग हस्तक्षेप के रूप में अनावरण किया गया है। हालांकि, एनएडी + मध्यवर्ती को सटीक रूप से निर्धारित करना अभी भी एक गंभीर चुनौती है, एनएमएन विशेष रूप से। यह अध्ययन एक उपन्यास विधि, डबल आइसोटोप-मध्यस्थता एलसी-एमएस / एमएस पद्धति (डीआईएमईएलसी-एमएस / एमएस) को पेश करने के लिए संचालित है, ताकि सटीक मात्रा का ठहराव किया जा सके एनएमएन जैविक नमूनों में।
2. एनएमएन की सटीक पहचान को प्रभावित करने वाले कारक
एनएमएन एंजाइमी गिरावट, नमूना प्रसंस्करण में रूपांतरण, विभिन्न कॉलम और निष्कर्षण स्थितियों में इसके जटिल व्यवहार, साथ ही मैट्रिक्स प्रभाव के लिए इसकी भेद्यता के कारण सटीक रूप से पता लगाना मुश्किल है।
विशेष रूप से, एनएमएन में उच्च ध्रुवीयता और कम अस्थिरता के गुण होते हैं, जो पानी में घुलना आसान होता है लेकिन कार्बनिक सॉल्वैंट्स में घुलना मुश्किल होता है। ये गुण कई पारंपरिक मात्रात्मक विश्लेषण विधियों के आवेदन को बहुत प्रतिबंधित करते हैं।
जन्मजैविक नमूने उदाहरण के लिएरक्त CD38 और CD73 (ECTO-5) की महत्वपूर्ण गतिविधियों को वहन करता है’-न्यूक्लियोटिडेज़), जिनमें से दोनों एनएमएन को सब्सट्रेट के रूप में उपयोग कर सकते हैं।
कॉलम में एनएमएन का व्यवहार बहुत जटिल है, शायद इसके आरोपों की द्विदलीय प्रकृति के कारण, ताकि निष्कर्षण और स्तंभ स्थितियों में सूक्ष्म अंतर एनएमएन के विश्वसनीय और सटीक पता लगाने को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करे।
3. की मुकाबला करने की रणनीतियाँ dimeLC-एमएस/एमएसप्रभाव कारकों के प्रभाव को कम करने के लिए
उपर्युक्त कारकों के हस्तक्षेप से बचने के लिए, एक प्रोटोटाइप कॉलम NMN-2 लागू किया जाता है। इस स्तंभ में C18-आधारित उच्च शुद्धता वाले सिलिका कण होते हैं जो कार्बन कणों की तुलना में हाइड्रोफिलिक यौगिकों को बांधने में अधिक सक्षम होते हैं, पृथक्करण की क्षमता में सुधार करते हैं।
पर्क्लोरिक एसिड (पीसीए) कार्यरत है क्योंकि यह न्यूनतम नुकसान के साथ प्लाज्मा जैसे जैविक नमूनों से एनएडी + और एनएमएन को कुशलतापूर्वक निकाल सकता है।
मैट्रिक्स प्रभाव के लिए समायोजित करने के लिए, पीसीए निष्कर्षण से पहले जैविक नमूनों में प्रत्येक समस्थानिक यौगिक की एक निश्चित राशि (1 माइक्रोन) जोड़ा जाता है।
4. फायदादक्षिणीका dimeLC-MS/MS
एलसी-एमएस/एमएस-संचालित कार्यप्रणाली में डबल आइसोटोपिक एनएमएन मानक, एनएमएन (एम + 14) और एनएमएन (एम + 5), नमूना प्रसंस्करण के दौरान एनएमएन के भाग्य का सटीक रूप से पता लगा सकते हैं, जो जैविक नमूनों में एनएमएन माप की सटीकता और विश्वसनीयता को काफी बढ़ाता है। इसके अलावा, डाइमएलसी-एमएस/एमएस निष्कर्षण दक्षता और विभिन्न प्रकार के जैविक नमूनों में एनएमएन की पूर्ण सांद्रता का मूल्यांकन कर सकते हैं।
5. निष्कर्ष
वांहैनई एलसी-एमएस / एमएस-डबल आइसोटोपिक एनएमएन मानकों के साथ संचालित कार्यप्रणाली जैविक नमूनों में एनएमएन को सटीक और मज़बूती से माप सकती है।इसका उपयोग एनएमएन सेवन पर भविष्य के अध्ययन के लिए किया जा सकता है।
6. संदर्भ
उन्नो, जुन्या एट अल "डबल आइसोटोप-मध्यस्थता तरल क्रोमैटोग्राफी-अग्रानुक्रम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (डाइमएलसी-एमएस / एमएस) द्वारा जैविक नमूनों में निकोटिनमाइड मोनोन्यूक्लियोटाइड की पूर्ण मात्रा। 2 जनवरी 2024, डीओआइ:10.1038/एस41514-023-00133-1
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