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डेंगू NS1 प्रोटीन का निर्धारण करने में थियो-एनएडी साइकलिंग के साथ अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा के असाधारण गुण
1. प्रस्तावना
डेंगू बुखार एक तीव्र संक्रामक रोग है जो किसके कारण होता है डेंगू वायरसएक संक्रमित एडीज प्रजाति (एई aegypti या Ae. albopictus) मच्छर के काटने के माध्यम से, मुख्य लक्षणों जैसे तेज बुखार, चक्कर आना, सिरदर्द, दाने और गंभीरदर्द (आंख, मांसपेशियों, जोड़ों, या हड्डी में दर्द), आदि। यह रोग उष्णकटिबंधीय और उपोष्णकटिबंधीय जलवायु में व्यापक रूप से प्रचलित है। अनुमानित 100 से 400 मिलियन लोग हर साल संक्रमित होते हैं, जहां 80% से अधिक आमतौर पर हल्के और स्पर्शोन्मुख होते हैं। बहरहाल, गंभीर डेंगू बुखार से मृत्यु का खतरा बढ़ सकता है अगर ठीक से इलाज न किया जाए। इस प्रकार, इस बीमारी का शीघ्र निदान इसके समय पर उपचार के लिए महत्वपूर्ण है।उल्लेखनीय रूप से, गैर-संरचनात्मक प्रोटीन 1 (एनएस 1), एक अत्यधिक संरक्षित ग्लाइकोप्रोटीन, मुख्य रूप से संक्रमण के दौरान स्रावित होता है डेंगू वायरस, जिसे गहन रूप से मुख्य रोगजनन कारक के रूप में माना जाता है डेंगू बुखार. इसलिए, एनएसआई को आमतौर पर इस बीमारी का जल्द पता लगाने के लिए बायोमार्कर के रूप में उपयोग किया जाता है।
इस अध्ययन में, एक सैंडविच एंजाइम से जुड़े इम्युनोसॉरबेंट परख(एलिसा)के साथ संयोजन में थियो निकोटिनमाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड (थियो-एनएडी / साइकिलिंग विधि (इसके बाद अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा कहा जाता हैएनएसआई का पता लगाने की सटीकता की पुष्टि करने के लिए एनएएटी के साथ तुलना के बाद एनएएटी के साथ इसकी तुलना की जाती है।
2. पारंपरिक पहचान विधियों के फायदे और नुकसान डेंगू बुखार
वर्तमान में, टीयहां चार मुख्य पहचान विधियां दी गई हैं के लिए डेंगू बुखार।
वायरल अलगाव और पहचान में उच्च विशिष्टता है लेकिन समय लेने वाली है, कम से कम 5 दिन लगते हैं। रैपिड एंटीजन टेस्ट अन्य तरीकों में सबसे तेज और सबसे अधिक लागत प्रभावी है, लेकिन संवेदनशीलता और विशिष्टता अपेक्षाकृत कम है। आईजीएम और आईजीजी पर आधारित सीरोलॉजिकल परीक्षण संक्रमण के दिनों की संख्या से सीमित है, जैसा कि वही परीक्षण में देरी होनी चाहिए जब तक कि एंटीबॉडी का स्तर पता लगाने योग्य स्तर तक नहीं बढ़ जाता।
क्लिनिक में, एनएएटी अक्सर निर्धारित करने के लिए लागू किया जाता है डेंगू बुखारइसकी उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता की गंदगी से। हालांकि, यह विधि महंगी, श्रमसाध्य और झूठी सकारात्मकता से ग्रस्त है, जिसे प्रशिक्षित कर्मियों द्वारा आयोजित किया जाना चाहिए। इन विधियों के नुकसान को दूर करने के लिए, एक नई पहचान विधि अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा है इस अध्ययन में लागू किया गया।
3. थियो-एनएडी साइकलिंग के साथ अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा का वर्कफ़्लो
एंटीबॉडी की एक जोड़ी हैसैंडविच एलिसा में NS1 प्रोटीन को कैप्चर करने के लिए उपयोग किया जाता है, और क्षारीय फॉस्फेट हैद्वितीयक एंटीबॉडी पर लेबल। एंटीबॉडी के अलावा, एक एंड्रोस्टेरोन व्युत्पन्न, 3α-hydroxysteroid डिहाइड्रोजनेज, थियो-एनएडी और एनएडीएच आरथियो-एनएडी एंजाइम साइक्लिंग सिस्टम के निर्माण के लिए उपयोग किया जाता है। थियो-एनएडी साइकलिंग प्रतिक्रिया के दौरान, थियो-एनएडीएच लगातार त्रिकोणीय संख्या फैशन में जमा होता है और इसे सीधे 405 एनएम के अवशोषण पर मापा जा सकता है.
4. डेंगू एनएस 1 प्रोटीन का पता लगाने में अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा और एनएएटी की तुलना
एनएएटी में 60 सैंपल डेंगू पॉजिटिव और 25 डेन्गू-नेगेटिव हैं। उन डेंगू पॉजिटिव नमूनों का एनएएटी साइक्लिंग थ्रेशोल्ड (सीटी) मूल्य 12.42 से 31.41 तक था। अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा में, 59 नमूने एनएएटी परिणामों के अनुरूप सकारात्मक हैं, जबकि 25 नमूने एनएएटी परिणामों के लिए पूरी तरह से नकारात्मक हैं।एनएएटी की तुलना में, अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा की संवेदनशीलता और विशिष्टता क्रमशः 98.3% और 100% है (तालिका 2)। 60 एनएएटी-पुष्टि किए गए डेंगू पॉजिटिव रोगी नमूनों में से, अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा में केवल 1 नमूना नकारात्मक है। एनएएटी डेटा से पता चला है कि नमूना 4 के सीटी मान के साथ एक प्रकार 21.59 DENV संक्रमण का मामला है। अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा के परिणाम NAAT परिणामों के साथ लगभग पूर्ण समझौते में हैं, जिसका कप्पा मान 0.972 (95% CI: 0.917-1.0).
5. निष्कर्ष
अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा विधि प्रदर्शन करना आसान है और इसे संचालित करने के लिए किसी पेशेवर प्रशिक्षु की आवश्यकता नहीं है। एक छोटा सा नमूना प्राप्त करने के तुरंत बाद पता लगाना शुरू किया जा सकता है। यह कम आय वाले देशों में डेंगू रोग का जल्द पता लगाने के लिए विशेष रूप से उपयुक्त है।हवाला
चेन, पो-काई एट अल "थियो-एनएडी साइक्लिंग के साथ अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा का उपयोग करके डेंगू एनएस 1 प्रोटीन के लिए उन्नत जांच विधि। वायरस, vol. 15,9, 1894. 8 सितंबर 2023, डीओआइ:10.3390/v15091894उत्पाद लाभ और विशेषताएं बोंटैक थियो-एनएडी/एस-एनएडी
बोंटैक ओ हैमें कुछ उद्यमों के पूर्वोत्तर चीनजो थियो-एनएडी का उत्पादन कर सकता हैके साथ "बोंजाइम"संपूर्ण-एंजाइमेटिक विधि(पर्यावरण के अनुकूल;कोई हानिकारक विलायक अवशेष नहीं) और अद्वितीय "बोनप्योर" सात-चरण शुद्धि तकनीक। BONTAC R&D, उत्पादन और बिक्री, के साथ intergrates उच्च गुणवत्ता और उत्पादों की स्थिर आपूर्ति सुनिश्चित करने के लिए स्व-स्वामित्व वाले कारखाने और कई अंतरराष्ट्रीय प्रमाणपत्र.