माउस कटिस्नायुशूल नसों में परिमाणीकरण एनएडी + और इसके मेटाबोलाइट्स
परिचय
निकोटिनमाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड (एनएडी +) के महत्वपूर्ण भागों और उम्र बढ़ने और न्यूरोडीजेनेरेशन में इसके मेटाबोलाइट्स को व्यापक रूप से मान्यता दी गई है। जैव रासायनिक अनुसंधान और उम्र बढ़ने और न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों को लक्षित करने वाले हस्तक्षेपों की दिशा में प्रगति को बढ़ावा देने के लिए, एनएडी + निस्तारण मार्ग में एनएडी + और इसके मेटाबोलाइट स्तर को सटीक रूप से निर्धारित करना बहुत महत्वपूर्ण है। यहां, सामान्य और घायल माउस कटिस्नायुशूल तंत्रिका में एनएडी+ और इसके मेटाबोलाइट्स के स्तर को मापने के लिए एक मजबूत और सटीक एलसी-एमएस/एमएस विधि लागू की जाती है।
NAD+ और उसके मेटाबोलाइट्स की मात्रा निर्धारित करने के लिए मौजूदा तरीकों की सीमाएँ
एनएडी+ और इसके मेटाबोलाइट्स की मात्रा निर्धारित करने के पारंपरिक तरीके, जैसे एचपीएलसी-यूवी, एनएमआर, केशिका क्षेत्र वैद्युतकणसंचलन, या वर्णमिति एंजाइमेटिक परख, संवेदनशीलता, चयनात्मकता और अप्रत्यक्ष माप में विभिन्न चुनौतियों का सामना करते हैं। सेलुलर या ऊतक एनएडी + और इसके चयापचयों के माप के लिए मौजूदा एलसी-एमएस/एमएस परख के लिए, अभी भी कई कठिनाइयों को दूर करना है, जैसे कि विस्तारित रन टाइम, खराब क्रोमैटोग्राफिक प्रतिधारण व्यवहार, और असंतोषजनक शिखर आकार। इसके अलावा, NAD+ बचाव मार्ग में केवल एक से तीन पदार्थों को इन तरीकों से कवर किया जा सकता है।
एलसी-एमएस/एमएस विधि के संशोधन
मौजूदा एलसी-एमएस/एमएस परख के आधार पर, क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों, सरोगेट मैट्रिक्स और एमएस/एमएस स्थितियों के संबंध में संशोधन किए जाते हैं। विशेष रूप से, मेथिलीन फॉस्फोनिक एसिड के 5 माइक्रोन को मोबाइल चरण योजक के रूप में नियोजित किया जाता है, जो स्पष्ट रूप से सिग्नल की तीव्रता और शिखर आकार को बढ़ावा देता है। कभी भी नमूनों की अपेक्षाकृत स्वच्छ और सरल प्रकृति और उनके छोटे आकार को देखते हुए, अल्ट्राप्योर पानी का परीक्षण एक विकल्प मैट्रिक्स के रूप में किया जाता है। हाइड्रोफिलिक इंटरैक्शन लिक्विड क्रोमैटोग्राफी कॉलम और हाइपरकार्ब कॉलम के बजाय, वाटर्स अटलांटिस प्रीमियर बीईएच सी 18 एएक्स कॉलम का उपयोग किया जाता है, जिसकी अनूठी मैक्सपीक एचपीएस उच्च-प्रदर्शन सतह तकनीक (कॉलम की आंतरिक दीवार को निष्क्रिय करना, धातु की सतह को खत्म करना) उच्च प्रतिलिपि प्रस्तुत करने, शिखर समरूपता और सभी विश्लेषणों के आधारभूत पृथक्करण को सक्षम बनाता है।इसके अलावा, आयन स्प्रे वोल्टेज के लिए 4000V के साथ, टर्बो हीटर तापमान के लिए 450 °C, गैस 1 के लिए गैस के लिए गैस के लिए 50 पीएसआई, गैस 1 के लिए 50 पीएसआई, गैस 2 के लिए 50 पीएसआई, पर्दे की गैस के लिए 30 पीएसआई, और टकराव गैस के लिए 12 पीएसआई के साथ चक्रीय एडेनोसिन डिफॉस्फेट राइबोज (सीएडीपीआर) चैनल में एनएडी + हस्तक्षेप संकेत को कम करने के लिए एमएस स्थितियों को अनुकूलित किया गया है।
तंत्रिका नमूनों का प्रतिनिधि क्रोमैटोग्राम (सामान्य बनाम घायल)
सभी पांच विश्लेषण बेसलाइन पृथक्करण प्राप्त करते हैं, जहां सीएडीपीआर न्यूरोडीजेनेरेशन मॉडल में एक संवेदनशील बायोमार्कर है। इसमें, कटिस्नायुशूल तंत्रिका एक्सोटॉमी अक्षीय अध: पतन को प्रेरित करती है, जिससे घायल नसों में एनएडी+ स्तर कम हो जाता है और एनएमएन स्तर बढ़ जाता है, जिसके परिणामस्वरूप एनएमएन/एनएडी+ अनुपात में लगभग 2 गुना वृद्धि होती है। इसके साथ ही, निकोटिनमाइड (एनएएम) और एडेनोसिन डाइफॉस्फेट राइबोज (एडीपीआर) का स्तर लगभग 2 गुना कम हो जाता है, जबकि सीएडीपीआर स्तर 8 गुना से अधिक बढ़ जाता है। ये परिणाम पहले रिपोर्ट किए गए शोध के अनुरूप हैं, जो एनएडी + और इसके मेटाबोलाइट्स की मात्रा निर्धारित करने में इस संशोधित एलएस-एमएस/एमएस विधि की सटीकता की पुष्टि करते हैं।
समाप्ति
यह संशोधित एलसी-एमएस/एमएस विधि 5 मिनट के संक्षिप्त रनटाइम के भीतर एनएडी+, एनएमएन, एनएएम, एडीपीआर और सीएडीपीआर के प्रभावी आधारभूत पृथक्करण को सक्षम बनाती है, जो विभिन्न न्यूरोलॉजिकल विकारों के शुरुआती निदान और उम्र बढ़ने और न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों के लिए दवा विकास में योगदान देती है।
हवाला
मा वाई, डेंग एल, डू जेड. चूहों के कटिस्नायुशूल नसों में एनएडी + और संबंधित मेटाबोलाइट्स की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक एलसी-एमएस/एमएस विधि का विकास और सत्यापन और तंत्रिका चोट पशु मॉडल के लिए इसका अनुप्रयोग। जे क्रोमैटोगर ए. डीओआई:10.1016/जे.क्रोमा.2024.464821
BONTAC NAD
बोंटैकयह 2012 से कोएंजाइम और प्राकृतिक उत्पादों के लिए कच्चे माल के अनुसंधान एवं विकास, निर्माण और बिक्री के लिए समर्पित है, जिसमें स्व-स्वामित्व वाले कारखानों, 170 से अधिक वैश्विक पेटेंट के साथ-साथ मजबूत अनुसंधान एवं विकास टीम भी शामिल है। BONTAC के पास जैवसंश्लेषण में समृद्ध अनुसंधान एवं विकास अनुभव और उन्नत तकनीक है।एनएडी और उसके अग्रदूत(जैसे। NMN और NR)। विभिन्न प्रकार के एनएडी का चयन किया जाना है, जिसमें एनएडी ईआर ग्रेड (एंडोक्सिन हटाना), एनएडी ग्रेड I (आईवीडी/आहार अनुपूरक/सौंदर्य प्रसाधन कच्चा पाउडर), एनएडी ग्रेड II (एपीआई/इंटरमीडिएट्स) और एनएडी ग्रेड IV (यदि घुलनशीलता पर कोई उच्च आवश्यकता है) शामिल हैं, जो लियोफिलाइज्ड पाउडर या क्रिस्टलीय पाउडर के रूप में प्रदान किया जा सकता है। BONTAC NAD की शुद्धता 98% से ऊपर पहुंच सकती है।
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