माउस कटिस्नायुशूल नसों में परिमाणीकरण NAD+ और इसके मेटाबोलाइट्स
परिचय
निकोटिनमाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड (एनएडी +) के महत्वपूर्ण भागों और उम्र बढ़ने और न्यूरोडीजेनेरेशन में इसके चयापचयों को व्यापक रूप से मान्यता दी गई है। उम्र बढ़ने और न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारियों को लक्षित करने वाले जैव रासायनिक अनुसंधान और हस्तक्षेपों की दिशा में प्रगति को बढ़ावा देने के लिए, एनएडी + बचाव मार्ग में एनएडी + और इसके मेटाबोलाइट स्तरों को सटीक रूप से निर्धारित करना बहुत महत्वपूर्ण है। यहां, सामान्य और घायल माउस कटिस्नायुशूल तंत्रिका में एनएडी + और इसके चयापचयों के स्तर को निर्धारित करने के लिए एक मजबूत और सटीक एलसी-एमएस / एमएस विधि लागू की जाती है।
एनएडी + और इसके चयापचयों की मात्रा निर्धारित करने के लिए मौजूदा तरीकों की सीमाएं
एनएडी + और इसके चयापचयों की मात्रा निर्धारित करने के लिए पारंपरिक तरीके, जैसे एचपीएलसी-यूवी, एनएमआर, केशिका क्षेत्र वैद्युतकणसंचलन, या वर्णमिति एंजाइमेटिक परख, संवेदनशीलता, चयनात्मकता और अप्रत्यक्ष माप में विभिन्न चुनौतियों का सामना करते हैं। सेलुलर या ऊतक NAD+ और इसके चयापचयों के माप के लिए मौजूदा LC-MS/MS assays के लिए, अभी भी कई कठिनाइयों को दूर करना है, जैसे विस्तारित रन टाइम, खराब क्रोमैटोग्राफिक प्रतिधारण व्यवहार और असंतोषजनक शिखर आकार। इसके अलावा, एनएडी + बचाव मार्ग में केवल एक से तीन पदार्थों को इन तरीकों से कवर किया जा सकता है।
LC-MS/MS विधि के संशोधन
मौजूदा एलसी-एमएस/एमएस परख के आधार पर, क्रोमैटोग्राफिक स्थितियों, सरोगेट मैट्रिक्स और एमएस/एमएस स्थितियों के बारे में संशोधन किए जाते हैं। विशेष रूप से, मेथिलीन फॉस्फोनिक एसिड के 5 माइक्रोन को मोबाइल चरण योजक के रूप में नियोजित किया जाता है, जो स्पष्ट रूप से सिग्नल तीव्रता और शिखर आकार को बढ़ावा देता है। कभी नमूने और उनके छोटे आकार की अपेक्षाकृत स्वच्छ और सरल प्रकृति को देखते हुए, अल्ट्राप्योर पानी को एक विकल्प मैट्रिक्स के रूप में परीक्षण किया जाता है। हाइड्रोफिलिक इंटरैक्शन लिक्विड क्रोमैटोग्राफी कॉलम और हाइपरकार्ब कॉलम के बजाय, वाटर्स अटलांटिस प्रीमियर बीईएच सी 18 एएक्स कॉलम का उपयोग किया जाता है, जिसकी अनूठी मैक्सपीक एचपीएस उच्च-प्रदर्शन सतह प्रौद्योगिकी (कॉलम आंतरिक दीवार को निष्क्रिय करना, धातु की सतह को खत्म करना) उच्च प्रजनन क्षमता, शिखर समरूपता और सभी विश्लेषणों के आधारभूत पृथक्करण को सक्षम बनाता है।इसके अलावा, एमएस स्थितियों को चक्रीय एडेनोसिन डिपोस्फेट राइबोस (सीएडीपीआर) चैनल में एनएडी + हस्तक्षेप संकेत को कम करने के लिए अनुकूलित किया जाता है, जबकि सीएडीपीआर और निकोटिनमाइड मोनोन्यूक्लियोटाइड (एनएमएन) की प्रतिक्रिया को बनाए रखते हुए, आयन स्प्रे वोल्टेज के लिए 4000 वी के साथ, टर्बो हीटर तापमान के लिए 450 डिग्री सेल्सियस, गैस 1 के लिए 50 पीएसआई, गैस 2 के लिए 50 पीएसआई, पर्दे गैस के लिए 30 पीएसआई, और टकराव गैस के लिए 12 पीएसआई।
तंत्रिका नमूनों के प्रतिनिधि क्रोमैटोग्राम (सामान्य बनाम घायल)
सभी पांच विश्लेषण आधारभूत पृथक्करण प्राप्त करते हैं, जहां सीएडीपीआर न्यूरोडीजेनेरेशन मॉडल में एक संवेदनशील बायोमार्कर है। इसमें, कटिस्नायुशूल तंत्रिका एक्सोटॉमी अक्षीय अध: पतन को प्रेरित करती है, जिससे घायल नसों में एनएडी + स्तर कम हो जाता है और एनएमएन स्तर बढ़ जाता है, जिसके परिणामस्वरूप एनएमएन/एनएडी + अनुपात में लगभग 2 गुना वृद्धि होती है। इसके साथ ही, निकोटिनामाइड (एनएएम) और एडेनोसिन डाइफॉस्फेट राइबोज (एडीपीआर) के स्तर में लगभग 2 गुना कमी आती है, जबकि सीएडीपीआर स्तर 8 गुना से अधिक बढ़ जाता है। ये परिणाम पहले रिपोर्ट किए गए शोध के अनुरूप हैं, जो NAD+ और इसके चयापचयों की मात्रा निर्धारित करने में इस संशोधित LS-MS/MS पद्धति की सटीकता की पुष्टि करते हैं।
समाप्ति
यह संशोधित एलसी-एमएस/एमएस विधि एनएडी +, एनएमएन, एनएएम, एडीपीआर, और सीएडीपीआर के प्रभावी आधारभूत पृथक्करण को 5 मिनट के संक्षिप्त रनटाइम के भीतर सक्षम बनाती है, जो उम्र बढ़ने और न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों के लिए विभिन्न न्यूरोलॉजिकल विकारों और दवा विकास के शुरुआती निदान में योगदान देती है।
हवाला
Ma Y, Deng L, Du Z. विकास और चूहों sciatic नसों में NAD+ और संबंधित चयापचयों की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक नियंत्रण रेखा एमएस / एमएस विधि के सत्यापन और एक तंत्रिका चोट पशु मॉडल के लिए अपने आवेदन. जे क्रोमैटोगर ए. डोई:10.1016/जे.क्रोमा.2024.464821
बोंटैक एनएडी
बोंटैक 2012 से कोएंजाइम और प्राकृतिक उत्पादों के लिए कच्चे माल के अनुसंधान एवं विकास, निर्माण और बिक्री के लिए समर्पित है, स्व-स्वामित्व वाले कारखानों, 170 से अधिक वैश्विक पेटेंट के साथ-साथ मजबूत आर एंड डी टीम के साथ। BONTAC के पास जैवसंश्लेषण में समृद्ध R&D अनुभव और उन्नत तकनीक है एनएडी और इसके अग्रदूत (जैसे। एनएमएन और एनआर)। एनएडी ईआर ग्रेड (एंडोक्सिन हटाने), एनएडी ग्रेड I (आईवीडी / आहार पूरक / सौंदर्य प्रसाधन कच्चे पाउडर), एनएडी ग्रेड II (एपीआई / मध्यवर्ती) और एनएडी ग्रेड IV (घुलनशीलता पर कोई उच्च आवश्यकता है) को शामिल करते हुए विभिन्न प्रकार के एनएडी का चयन किया जाना है, जिसे लियोफिलिज्ड पाउडर या क्रिस्टलीय पाउडर के रूप में प्रदान किया जा सकता है। BONTAC NAD की शुद्धता 98% से ऊपर पहुंच सकती है।
अस्वीकरण
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