डेंगू NS1 प्रोटीन का निर्धारण करने में थियो-एनएडी साइक्लिंग के साथ अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा के असाधारण गुण
1. परिचय
डेंगू बुखार एक तीव्र संक्रामक रोग है जो इसके कारण होता हैडेंगू वायरस एक संक्रमित एडीज प्रजाति (एई. एजिप्टी या एई. अल्बोपिक्टस) मच्छर के काटने के माध्यम से,मुख्य लक्षणों जैसे तेज बुखार, चक्कर आना, सिरदर्द, दाने औरगंभीर दर्द (आंख, मांसपेशियों, जोड़ों या हड्डियों में दर्द), आदि। यह रोग उष्णकटिबंधीय और उपोष्णकटिबंधीय जलवायु में व्यापक रूप से प्रचलित है। अनुमानित 100 से 400 मिलियन लोग हर साल संक्रमित होते हैं, जहां 80% से अधिक आमतौर पर हल्के और स्पर्शोन्मुख होते हैं। बहरहाल, गंभीर डेंगू बुखार मृत्यु के जोखिम को बढ़ा सकता है यदि ठीक से इलाज न किया जाए। इस प्रकार, इस बीमारी का शीघ्र निदान इसके समय पर उपचार के लिए महत्वपूर्ण है।विशेष रूप से, गैर-संरचनात्मक प्रोटीन 1 (NS1), एक अत्यधिक संरक्षित ग्लाइकोप्रोटीन, मुख्य रूप से संक्रमण के दौरान स्रावित होता हैडेंगूवायरस, जिसे गहन रूप से मुख्य रोगजनन कारक के रूप में माना जाता हैडेंगू बुखार. इसलिए, एनएसआई का उपयोग आमतौर पर इस बीमारी का शीघ्र पता लगाने के लिए बायोमार्कर के रूप में किया जाता है।
इस अध्ययन में, एक सैंडविच एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) के साथ संयोजन मेंथियो निकोटिनमाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड (थियो-एनएडी/एस-एनएडी)साइकिल चलाने की विधि (इसके बाद अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा कहा जाता है) का उपयोग एनएसआई का पता लगाने के लिए किया जाता है, इसके बाद एनएएटी के साथ तुलना की जाती है ताकि इसकी पहचान सटीकता की पुष्टि की जा सके।
2. पारंपरिक पहचान विधियों के फायदे और नुकसानडेंगू बुखार
वर्तमान में, टीयहां चार मुख्य पहचान विधियां दी गई हैंके लिए डेंगू बुखार।
वायरल अलगाव और पहचान में उच्च विशिष्टता होती है लेकिन इसमें समय लगता है, कम से कम 5 दिन लगते हैं। द रैपिड एंटीजन परीक्षण अन्य तरीकों के बीच सबसे तेज़ और सबसे अधिक लागत प्रभावी है, लेकिन संवेदनशीलता और विशिष्टता अपेक्षाकृत कम है। आईजीएम और आईजीजी पर आधारित सेरोलॉजिकल परीक्षण सीमित है संक्रमण के दिनों की संख्या, के रूप मेंदएंटीबॉडी के स्तर तक परीक्षण में देरी होनी चाहिए पता लगाने योग्य स्तर तक बढ़ जाता है।
क्लिनिक में, NAAT को अक्सर निर्धारित करने के लिए लागू किया जाता हैडेंगू बुखार इसकी उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता की गंदगी से। हालांकि, यह विधि महंगी, श्रमसाध्य और झूठी सकारात्मकता के लिए प्रवण है, जिसे प्रशिक्षित कर्मियों द्वारा संचालित किया जाना चाहिए।इन विधियों के नुकसान को दूर करने के लिए, एक नई पहचान विधिअल्ट्रासेंसिटिव एलिसा है इस अध्ययन में लागू किया गया।
3. थियो-एनएडी साइक्लिंग के साथ अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा का वर्कफ़्लो
एंटीबॉडी की एक जोड़ीहै सैंडविच एलिसा और क्षारीय फॉस्फेट में NS1 प्रोटीन को कैप्चर करने के लिए उपयोग किया जाता हैहै द्वितीयक एंटीबॉडी पर लेबल किया गया। एंटीबॉडी के अलावा, एक एंड्रोस्टेरोन व्युत्पन्न, 3α-हाइड्रॉक्सीस्टेरॉयड डिहाइड्रोजनेज, थियो-एनएडी और एनएडीएचहैं थियो-एनएडी एंजाइम साइक्लिंग सिस्टम के निर्माण के लिए उपयोग किया जाता है। थियो-एनएडी साइक्लिंग प्रतिक्रिया के दौरान, थियो-एनएडीएच लगातार त्रिकोणीय संख्या फैशन में जमा होता है और इसे सीधे 405 एनएम के अवशोषण पर मापा जा सकता है.
4. डेंगू NS1 प्रोटीन का पता लगाने में अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा और NAAT की तुलना
एनएएटी में, 60 नमूने डेंगू-पॉजिटिव हैं, और 25 डेंगू-नकारात्मक हैं। उन डेंगू-पॉजिटिव नमूनों का एनएएटी साइक्लिंग थ्रेशोल्ड (सीटी) मान 12.42 से 31.41 तक था।अतिसंवेदनशील एलिसा में, 59 नमूने NAAT परिणामों के अनुरूप सकारात्मक हैं, जबकि 25 नमूने NAAT परिणामों के अनुरूप पूरी तरह से नकारात्मक हैं।एनएएटी की तुलना में, अतिसंवेदनशील एलिसा की संवेदनशीलता और विशिष्टता क्रमशः 98.3% और 100% है (तालिका 2)। 60 एनएएटी-पुष्टि डेंगू-पॉजिटिव रोगी नमूनों में से, अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा में केवल 1 नमूना नकारात्मक है। एनएएटी डेटा से पता चला है कि नमूना 4 के सीटी मान के साथ टाइप 21.59 डीईएनवी संक्रमण का मामला है। अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा के परिणाम एनएएटी परिणामों के साथ लगभग पूर्ण समझौते में हैं, 0.972 (95% सीआई: 0.917) के कप्पा मान के साथ-1.0).
5. निष्कर्ष
Ultrasensitive ELISA विधि का प्रदर्शन करना आसान है और इसे संचालित करने के लिए किसी पेशेवर प्रशिक्षुओं की आवश्यकता नहीं होती है. टनएक छोटा सा नमूना प्राप्त करने के तुरंत बाद उसका पता लगाना शुरू किया जा सकता है। यह विशेष रूप से शीघ्र पता लगाने के लिए उपयुक्त हैडेंगूमें रोग कम आय वाले देश.हवाला
चेन, पो-काई एट अल। "थियो-एनएडी साइक्लिंग के साथ अल्ट्रासेंसिटिव एलिसा का उपयोग करके डेंगू NS1 प्रोटीन के लिए उन्नत पहचान विधि। वायरस, खंड 15,9, 1894। 8 सितंबर 2023, doi:10.3390/v15091894उत्पाद लाभ और विशेषताएंबोंटाक थियो-एनएडी/एस-एनएडी
बोंटैक is oमें कुछ उद्यमों में से NEचीन जो थियो-एनएडी का उत्पादन कर सकता है, के साथ"बोनजाइम" संपूर्ण-एंजाइमेटिक विधि (पर्यावरण के अनुकूल; कोई हानिकारक विलायक अवशेष नहीं(ख) और अद्वितीय "बोनप्योर" सात-चरणीय शुद्धिकरण तकनीक। BONTAC अनुसंधान एवं विकास, उत्पादन और बिक्री को एकीकृत करता है उत्पादों की उच्च गुणवत्ता और स्थिर आपूर्ति सुनिश्चित करने के लिए स्व-स्वामित्व वाले कारखाने और कई अंतरराष्ट्रीय प्रमाणपत्र.
