डेंगू NS1 प्रोटीन का निर्धारण करने में थियो-NAD साइक्लिंग के साथ अल्ट्रासेंसिटिव ELISA के असाधारण गुण
1. परिचय
डेंगू बुखार एक तीव्र संक्रामक रोग है जोडेंगू वायरस संक्रमित एडीज प्रजाति (Ae. aegypti या Ae. albopictus) मच्छर के काटने से होता है,जिसके मुख्य लक्षणों में तेज बुखार, चक्कर आना, सिरदर्द, दाने औरगंभीर दर्द (आंख, मांसपेशियों, जोड़ों या हड्डियों में दर्द) आदि शामिल हैं। यह बीमारी उष्णकटिबंधीय और उपोष्णकटिबंधीय जलवायु में व्यापक रूप से प्रचलित है। अनुमानित 100 से 400 मिलियन लोग हर साल संक्रमित होते हैं, जिनमें से 80% से अधिक आमतौर पर हल्के और लक्षणहीन होते हैं। फिर भी, गंभीर डेंगू बुखार का ठीक से इलाज न किए जाने पर मृत्यु का खतरा बढ़ सकता है। इस प्रकार, इस बीमारी का शीघ्र निदान इसके समय पर उपचार के लिए महत्वपूर्ण है।उल्लेखनीय रूप से, गैर-संरचनात्मक प्रोटीन 1 (NS1), एक अत्यधिक संरक्षित ग्लाइकोप्रोटीन, मुख्य रूप सेडेंगूवायरस के संक्रमण के दौरान स्रावित होता है, जिसेडेंगू बुखार का मुख्य रोगजनन कारक माना जाता है। इसलिए, NS1 का उपयोग आमतौर पर इस बीमारी के शीघ्र पता लगाने के लिए एक बायोमार्कर के रूप में किया जाता है।
इस अध्ययन में, एक सैंडविच एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख (ELISA) का उपयोगथियो निकोटिनामाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड (थियो-NAD/S-NAD)साइक्लिंग विधि (जिसे आगे अल्ट्रासेंसिटिव ELISA कहा जाता है) के साथ संयोजन में NS1 का पता लगाने के लिए किया जाता है, इसके बाद इसकी पहचान सटीकता की पुष्टि करने के लिए NAAT के साथ तुलना की जाती है।
2. पारंपरिक पहचान विधियों के फायदे और नुकसानडेंगू बुखार
वर्तमान में,चार मुख्य पहचान विधियाँ हैंहटाने के लिए डेंगू बुखार।
वायरस अलगाव और पहचान में उच्च विशिष्टता होती है लेकिन समय लगता है, कम से कम 5 दिन लगते हैं। तेजी से एंटीजन परीक्षण अन्य विधियों में सबसे तेज़ और सबसे किफायती है, लेकिन संवेदनशीलता और विशिष्टता अपेक्षाकृत कम है। IgM और IgG पर आधारित सीरोलॉजिकल परीक्षण संक्रमण के दिनों की संख्या से सीमित है, क्योंकि संक्रमण के दिनों की संख्या, जैसाtheपरीक्षण तब तक स्थगित किया जाना चाहिए जब तक कि एंटीबॉडी का स्तर पता लगाने योग्य स्तर तक न बढ़ जाए।
क्लिनिक में, NAAT अक्सर इसकी उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता के कारण निर्धारित करने के लिए लागू किया जाता है। हालांकि, यह विधि महंगी, श्रमसाध्य है, और गलत सकारात्मकता की संभावना है, जिसे प्रशिक्षित कर्मियों द्वारा किया जाना चाहिए।डेंगू बुखार इसकी उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता के कारण। हालाँकि, यह विधि महंगी, श्रमसाध्य है, और गलत सकारात्मकता की संभावना होती है, जिसे प्रशिक्षित कर्मियों द्वारा किया जाना चाहिए।इन विधियों के नुकसान को दूर करने के लिए, एक नई पहचान विधिअल्ट्रासेंसिटिव ELISA इस अध्ययन में लागू की गई है।
3. थियो-NAD साइक्लिंग के साथ अल्ट्रासेंसिटिव ELISA की कार्यप्रणाली
एंटीबॉडी की एक जोड़ीहैसैंडविच ELISA में NS1 प्रोटीन को पकड़ने के लिए उपयोग की जाती है, और क्षारीय फॉस्फेटहैद्वितीयक एंटीबॉडी पर लेबल किया जाता है। एंटीबॉडी के अलावा, एक एंड्रोस्टेरोन व्युत्पन्न, 3α-हाइड्रॉक्सीस्टेरॉइड डिहाइड्रोजनेज, थियो-NAD, और NADHहैंथियो-NAD एंजाइम साइक्लिंग प्रणाली बनाने के लिए उपयोग किया जाता है। थियो-NAD साइक्लिंग प्रतिक्रिया के दौरान, थियो-NADH लगातार त्रिकोणीय संख्या फैशन में जमा होता है और 405 एनएम के अवशोषण पर सीधे मापा जा सकता है।.
4. डेंगू NS1 प्रोटीन का पता लगाने में अल्ट्रासेंसिटिव ELISA और NAAT की तुलना
NAAT में, 60 नमूने डेंगू-पॉजिटिव हैं, और 25 डेंगू-नेगेटिव हैं। उन डेंगू-पॉजिटिव नमूनों का NAAT साइक्लिंग थ्रेशोल्ड (CT) मान 12.42 से 31.41 तक था।अल्ट्रासेंसिटिव ELISA में, 59 नमूने NAAT परिणामों के अनुरूप सकारात्मक हैं, जबकि 25 नमूने NAAT परिणामों के पूरी तरह से अनुरूप नकारात्मक हैं।NAAT की तुलना में, अल्ट्रासेंसिटिव ELISA की संवेदनशीलता और विशिष्टता क्रमशः 98.3% और 100% है (तालिका 2)। NAAT-पुष्टि किए गए 60 डेंगू-पॉजिटिव रोगी नमूनों में से, केवल 1 नमूना अल्ट्रासेंसिटिव ELISA में नकारात्मक है। NAAT डेटा से पता चला कि नमूना टाइप 4 DENV संक्रमण का मामला है जिसका CT मान 21.59 है। अल्ट्रासेंसिटिव ELISA के परिणाम NAAT परिणामों के साथ लगभग पूर्ण सहमति में हैं, कप्पा मान 0.972 (95% CI: 0.917-1.0).
5. Conclusion
अल्ट्रासेंसिटिव ELISA विधि करना आसान है और इसे संचालित करने के लिए पेशेवर प्रशिक्षुओं की आवश्यकता नहीं हैअल्ट्रासेंसिटिव ELISA विधि करना आसान है और इसे संचालित करने के लिए पेशेवर प्रशिक्षुओं की आवश्यकता नहीं होती है.छोटा नमूना प्राप्त करने के तुरंत बाद पहचान शुरू की जा सकती है। यह विशेष रूप सेडेंगूबीमारी का शीघ्र पता लगाने के लिए उपयुक्त हैकम आय वाले देशों में.参考文献
चेन, पो-काई एट अल. "एडवांस्ड डिटेक्शन मेथड फॉर डेंगू NS1 प्रोटीन यूज़िंग अल्ट्रासेंसिटिव ELISA विद थियो-NAD साइक्लिंग." वायरस वॉल्यूम 15,9 1894. 8 सितंबर 2023, doi:10.3390/v15091894उत्पाद लाभ और विशेषताएंBONTAC थियो-NAD/S-NAD
BONTAC उन कुछ उद्यमों में से एक हैजो थियो-NAD का उत्पादन कर सकते हैंचीन जो थियो-NAD उत्पन्न कर सकता है, जिसमें"बॉनज़ाइम" संपूर्ण-एंजाइमेटिक विधि (पर्यावरण के अनुकूल; कोई हानिकारक विलायक अवशेष नहीं) और अद्वितीय "बॉनप्योर" सात-चरण शुद्धिकरण तकनीक है। BONTAC अनुसंधान एवं विकास, उत्पादन और बिक्री को एकीकृत करता है, साथ ही स्वयं के कारखाने और कई अंतरराष्ट्रीय प्रमाणपत्र उत्पादों की उच्च गुणवत्ता और स्थिर आपूर्ति सुनिश्चित करते हैं.
